Выявление условно патогенных микроорганизмов методом пцр в режиме реального времени тест система бакскринупм bak skrin detection of conditionally pathogenic microorganisms by pcr in real time

ДЕЗИНФЕКЦИЯ ПРИ ИССЛЕДОВАНИИ МАТЕРИАЛА, ЗАРАЖЕННОГО БАКТЕРИЯМИ I-IV ГРУПП ПАТОГЕННОСТИ ПРИ РАБОТЕ МЕТОДОМ ПЦР

ВВЕДЕНИЕ

Внедрение в практику лабораторной диагностики инфекционных болезней метода ПЦР должно быть обеспечено соответствующими методами подготовки проб, предусматривающими обеззараживание исследуемого материала.

Используемые обычно в практике табельные средства стерилизации не могут быть применены при ПЦР-анализе из-за повреждающего действия на ДНК или ингибирования ПЦР.

Существующие Санитарные Правила 1.2.011-94 не предусматривают выполнение современных генетических методов, включая ПЦР. Данные методы широко используются для обнаружения различных микроорганизмов.

ОБРАБОТКА МАТЕРИАЛА

При работе с бактериями I-II групп патогенности предлагается обработка мертиолятом натрия и лизирующим буфером. Для бактерий III-IV групп используется термическая обработка или лизирующий буфер.

Для обеззараживания материала с спорообразующими микроорганизмами, включая Bacillus anthracis, применяют герминацию спор, пенициллин, прогревание и лизирующий буфер.

Разработанные способы инактивации обеззараживают материал, не повреждают ДНК и не ингибируют ПЦР.

ЖИВЫЕ ВАКЦИНЫ

Живые вакцины отнесены к классу В в соответствии с СанПиН, однако другие виды вакцин отнесены к другим классам. Живые вакцины базируются на живых микроорганизмах с пониженной патогенностью.

ВИДЫ ВАКЦИН

  1. Живые: микроорганизм-возбудитель способен вызвать заболевание, но его патогенность снижена в лаборатории.
  2. Мертвые (инактивированные): микроорганизмы убиты, но сохранена их способность вызвать иммунный ответ.
  3. Субъединичные: содержат частицы микроорганизмов, способные вызвать иммунный ответ.
  4. Рекомбинантные: содержат гены микроорганизмов, что позволяет иммунной системе узнать их и атаковать при втором контакте.

Знание видов вакцин важно для определения соответствующих методов дезинфекции при работе с ними.

МЕТОДИКА БЕЗОПАСНОСТИ

При использовании различных видов вакцин необходимо соблюдать основные меры предосторожности, чтобы обезопасить себя и окружающих от возможных инфекций.

Поддержание чистоты и проведение дезинфекции в помещениях, где проводится работа с вакцинами, является обязательным требованием для предотвращения передачи инфекций.

Необходимо также соблюдать инструкции производителя вакцин по их хранению, транспортировке и использованию.

Бережное обращение с материалом и соблюдение всех рекомендаций по дезинфекции обеспечит безопасную работу с вакцинами и исключит возможность заражения.

Регулярное обучение персонала по правилам безопасности и дезинфекции также является важным аспектом обеспечения безопасной работы с вакцинами.

Наличие четкой методики обеззараживания материалов и соблюдение всех рекомендаций по безопасной работе с вакцинами позволят минимизировать риски возможной инфекции и обеспечат эффективное проведение работы по вакцинации.

## Виды вакцин

1. Живые. Содержат ослабленные возбудители инфекций, которые способны вызвать иммунитет без развития болезни.

2. Инактивированные. Называются неживыми или убитыми, так как возбудители в них полностью обезврежены.

3. Анатоксины. Содержат только токсины микроорганизмов, предварительно дезактивированные.

4. Молекулярные. Полностью синтезируются в лаборатории с использованием генной инженерии.

## Почему живые вакцины – это класс В

Живые вакцины содержат возбудителей инфекций, относящихся к 3–4 группам патогенности. Их относили к медотходам класса Б, но из-за потенциальной опасности были переведены в класс В.

Прививки с живыми вакцинами делают от болезней, таких как корь, оспа и грипп. При попадании в природу, даже сниженно возбудители могут вызвать создание новых опасных штаммов. Поэтому живые вакцины обрабатывают как медотходы класса В.

## К какому классу относят прочие вакцины

Прочие вакцины, не содержащие микроорганизмов, относят к классу Г. Они не представляют эпидемиологической угрозы и не требуют обеззараживания.

Инфекционные стационары играют важную роль в диагностике и лечении инфекционных заболеваний. С точки зрения обращения с медотходами, важно правильно определять классы отходов и соблюдать правила обращения с ними.

Согласно СанПиН 2.1.3684-21, класс В включает в себя медицинские отходы, загрязненные кровью и другими биологическими жидкостями, пробками шприцев, фильтрами и другими материалами, которые могут быть заражены инфекционными агентами. В инфекционных стационарах отходы класса В составляют значительную часть всех медицинских отходов. Их сбор, хранение и утилизация требуют особых мер предосторожности и строгого соблюдения правил безопасности.

Класс Г: отходы прочие

Отходы класса Г включают в себя все остальные медицинские отходы, не вошедшие в классы А, Б и В. Это могут быть использованные одноразовые инструменты, расходные материалы, лекарства, пустая тара и другие материалы, не загрязненные инфекционными агентами. Их утилизация также подлежит строгим правилам и требует надлежащей обработки для обеспечения безопасности.

Организация управления медицинскими отходами в инфекционном стационаре

Организация управления медицинскими отходами в инфекционном стационаре осуществляется в соответствии с действующим законодательством и санитарными нормами. В данном случае особое внимание уделяется сбору, временному хранению, транспортировке и утилизации медицинских отходов различных классов.

Сбор

Для сбора медицинских отходов используются специальные контейнеры, различные по цвету и обозначению класса отходов. Это позволяет идентифицировать и разделять отходы уже на этапе их образования, что облегчает последующую обработку и утилизацию.

Хранение

Медицинские отходы временно хранятся в специально оборудованных помещениях или контейнерах, обеспечивающих необходимые условия сохранности и безопасности для персонала и окружающей среды. Каждый класс отходов должен храниться отдельно с соблюдением правил и требований по санитарной безопасности.

Транспортировка

Для транспортировки медицинских отходов используются специальные транспортные средства, оборудованные для безопасной перевозки различных классов отходов. Важно соблюдать правила упаковки, маркировки и манипулирования с опасными отходами во избежание возможных аварий и загрязнений.

Утилизация

Утилизация медицинских отходов проводится с применением специализированных технологий и оборудования в соответствии с классом отходов. Она должна обеспечивать безопасность окружающей среды и предотвращать распространение инфекционных заболеваний. В качестве утилизационных методов могут использоваться сжигание, автоклавирование, химическая обработка и другие технологии, соответствующие стандартам и требованиям.

Таким образом, правильная организация управления медицинскими отходами в инфекционном стационаре играет важную роль в обеспечении безопасности пациентов, персонала и окружающей среды. Это требует строгого соблюдения всех правил и нормативов по обращению с медицинскими отходами и постоянного контроля за выполнением этих требований.

Стандарты утилизации медицинских отходов в России

Отходы класса В включают материалы, контактировавшие с патогенами I и II групп. Эти группы включают микроорганизмы, способные вызывать серьезные заболевания у людей, такие как ВИЧ, парентеральные гепатиты, COVID-19, клещевой энцефалит и другие. Все отходы, образующиеся при обследовании и лечении пациентов отделений соответствующего профиля, относятся к классу В.

Отходы данного класса собираются в промаркированную красную тару.

Напомним: ввиду высокой эпидемиологической опасности отходы класса В должны быть обеззаражены исключительно физическим методом. Для этого на территории инфекционных больниц используют установки (ЭКОС, ЭКОДАС), предназначенные для измельчения и стерилизации эпидемиологически опасного мусора. После обеззараживания отходы собираются в тару любого цвета, кроме желтого и красного.

Все без исключения отходы, образующиеся в результате работы ковидных отделений либо стационаров, также относятся к классу В.

Класс Г: токсичные медицинские отходы

Профиль этих отходов не отличается от других ЛПУ. К отходам класса Г в инфекционных стационарах относятся люминисцентные лампы, рециркуляторы воздуха, ртутные термометры (при их наличии в отделениях), а также просроченные лекарственные препараты и дезсредства.

Законодательство

В соответствии со статьей 39 Федерального закона от 30.03.1999 N 52-ФЗ О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения (Собрание законодательства Российской Федерации, 1999, N 14, ст. 1650; 2020, N 29, ст. 4504), пунктом 2 Положения о государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании, утвержденного постановлением Правительства Российской Федерации от 24.07.2000 N 554 (Собрание законодательства Российской Федерации, 2000, N 31, ст. 3295; 2005, N 39, ст. 3953), постановляю:

  1. Настоящее постановление вступает в силу с 01.09.2023.

Изменения в санитарные правила и нормы

  1. Дополнить пункт 3 абзацем следующего содержания: Контейнерные площадки и специальные площадки, расположенные на территории производственных объектов, доступ населения к которым ограничен, при соблюдении требований, установленных пунктом 9, допускается не ограждать..

  2. В пункте 25 слово исключенние заменить словом исключение.

  3. В пункте 31 после слов и подметание дополнить словами в соответствии с региональными требованиями по благоустройству.

  4. Пункт 33 изложить в следующей редакции:

"Хозяйствующим субъектам, отвечающим за содержание соответствующих территорий, для очистки дорожных покрытий допускается использование антигололедных реагентов, разрешенных к применению в соответствии с главой II Единого перечня продукции (товаров), подлежащей государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории евразийского экономического союза, и разделом 19 главы II Единых санитарно-эпидемиологических и гигиенических требований к продукции (товарам), подлежащей санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю), утвержденных решением Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299 "О применении санитарных мер в таможенном союзе" (далее — Решение N 299)

5. В пункте 44 слово "субъктами" заменить словом "субъектами".

6. Пункт 48 изложить в редакции: "48. На территориях торговых объектов (торговых центров и торговых комплексов) площадью более 400 м2 хозяйствующими субъектами, которым принадлежат торговые объекты, должны быть оборудованы общественные туалеты."

7. В пункте 52:

а) в абзаце третьем слова "водных объектов;" заменить словами "водных объектов.";

б) абзац четвертый изложить в следующей редакции:

"Расстояния от многоквартирных жилых домов, индивидуальных жилых домов, детских игровых и спортивных площадок, зданий и игровых, прогулочных и спортивных площадок организаций воспитания и обучения, отдыха и оздоровления детей и молодежи, медицинских, спортивно-оздоровительных, культурно-просветительных организаций, учреждений по предоставлению социальных услуг гражданам, территорий ведения гражданами садоводства и огородничества до колумбариев и стен скорби для захоронения урн с прахом умерших, до зданий и сооружений, имеющих в своем составе помещения для хранения тел умерших, подготовки их к похоронам, проведения церемонии прощания должны составлять не менее 50 метров.";

в) абзац пятый исключить.

8. Пункт 57 изложить в следующей редакции:

"57. Погребение трупов, а также патолого-анатомических, анатомических отходов, инфицированных возбудителями инфекционных заболеваний I-II групп патогенности, осуществляют в соответствии с санитарно-эпидемиологическими требованиями по профилактике инфекционных и паразитарных болезней, а также к организации и проведению санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий.".

9. В абзаце втором пункта 60 слово "использемые" заменить словом "используемые".

10. В пункте 64 слово "хозяйственно-питьевового" заменить словом "хозяйственно-питьевого".

11. Изложить пункт 70 в следующей редакции:

"70. Не допускается превышение гигиенических нормативов содержания загрязняющих веществ в атмосферном воздухе: в жилой зоне, на территориях дачных и садово-огородных участков — 1,0 ПДК (ОБУВ);" и далее по тексту.

12. Абзац первый пункта 71 дополнить предложением следующего содержания:

"Санитарно-противоэпидемические (профилактические) мероприятия оформляются хозяйствующим субъектом в виде плана мероприятий со сроками и ответственными лицами, по согласованию с территориальными органами исполнительной власти, уполномоченными на осуществление федерального государственного санитарно-эпидемиологического контроля (надзора).".

13. Пункт 82 дополнить вторым абзацем следующего содержания:

"В период ежегодных профилактических ремонтов отключение систем горячего водоснабжения не должно превышать сроки вывода в ремонт источников тепловой энергии, тепловых сетей и объектов централизованных систем горячего водоснабжения, в том числе водопроводных сетей, в соответствии со сводным годовым планом ремонтов, утверждаемым на основании Правил вывода в ремонт и из эксплуатации источников тепловой энергии и тепловых сетей и Правил горячего водоснабжения, а в случае вывода во внеплановый ремонт указанных объектов (в том числе в случае отсутствия сводного годового плана ремонтов), либо при проведении работ в отношении внутридомовых инженерных систем теплоснабжения и (или) горячего водоснабжения, а также при проведении профилактических испытаний источников тепловой энергии, тепловых сетей, тепловых энергоустановок, объектов систем горячего водоснабжения — 14 суток, исчисляемых по каждому основанию перерыва в горячем водоснабжении раздельно, если более продолжительный срок не согласован с органом местного самоуправления".

14. В пункте 95 слово "хозяйстующими" заменить словом "хозяйствующими".

15. Пункт 99 дополнить вторым абзацем следующего содержания:

"Выбор приоритетных показателей для производственного контроля качества воды в подземных источниках в зонах влияния различных объектов хозяйственной деятельности осуществляется в соответствии с приложением N 6 к Санитарным правилам.".

16. Пункт 110 изложить в редакции:

"110. Хозяйствующие субъекты, осуществляющие водопользование, должны осуществлять производственный контроль за соблюдением Санитарных правил и гигиенических нормативов, санитарно-противоэпидемические (профилактические) мероприятия, с проведением лабораторных исследований и измерений с привлечением испытательных лабораторных центров, аккредитованных в национальной системе аккредитации в соответствии с законодательством Российской Федерации.

При осуществлении производственного контроля выбор контролируемых химических веществ осуществляется в соответствии с приложением N 6 к Санитарным правилам.".

17. В пункте 111:

а) слова "на показатели для возбудителей" заменить словами "для определения возбудителей";

б) слова "сальмонеллы, шигеллы, Campylobacter jejuni" заменить словами "Salmonella ssp., Shigella ssp., Pseudomonas aeruginosa, Legionella pneumophila, Campylobacter ssp., Yersinia enterocolitica, Listeria monocytogenes, Candida albicans";

в) слово "энеровирусы" заменить словом "энтеровирусы";

г) после слов "вирусы гепатита A" дополнить словами ", норовирусы, астровирусы".

18. В пункте 118:

а) в абзаце втором перед словом "ПДК" дополнить словом "превышения";

б) абзац третий изложить в следующей редакции:

"возбудители кишечных инфекций бактериальной и вирусной природы;".

19. Пункт 124 изложить в редакции:

"124.Жилые дома, общежития, центры временного размещения иностранных граждан, лиц без гражданства, в том числе беженцев и иммигрантов (далее — центры временного размещения) должны находиться за пределами промышленной площадки.

Земельные участки многоквартирных жилых домов, общежитий, центров временного размещения иностранных граждан, лиц без гражданства, в том числе беженцев и иммигрантов должны: соответствовать гигиеническим нормативам, установленным для атмосферного воздуха, почвы, уровням ионизирующих и неионизирующих излучений территорий населенных мест, уровням шума; быть благоустроены, озеленены, оборудованы проездами и тротуарами с твердым покрытием, иметь электрическое освещение; ежедневно убираться; поливаться водой при температуре воздуха выше плюс 10 °C, подвергаться антигололедным мероприятиям при температуре ниже 0 °C в соответствии с региональными требованиями по благоустройству."

20. В пункте 126:

а) в абзаце первом после слов "В помещениях" дополнить словами "общественного назначения", слова ", помещениях общего пользования многоквартирных жилых домов" исключить;

б) абзац четвертый изложить в следующей редакции:

"В помещениях общего пользования многоквартирных жилых домов хозяйствующим субъектом, осуществляющим управление многоквартирным домом, должна проводиться влажная уборка с применением моющих и чистящих средств с кратностью, устанавливаемой в соответствии с жилищным законодательством.

В помещениях многоквартирных жилых домов, общежитий, центров временного размещения не должно быть синантропных насекомых и грызунов. При их появлении хозяйствующие субъекты, эксплуатирующие объекты, должны проводить дезинсекционные и дератизационные мероприятия в соответствии с санитарно-эпидемиологическими требованиями по профилактике инфекционных болезней.

Дератизационные и дезинсекционные работы по уничтожению грызунов и насекомых в местах общего пользования (подвалах, технических подпольях и др.), помещениях общественного назначения проводятся хозяйствующими субъектами, эксплуатирующими объекты, в жилых помещениях — собственниками жилого помещения.".

21. Пункт 126 дополнить сноской 45.1 следующего содержания:

" Часть 1.2 статьи 161 Жилищного кодекса Российской Федерации от 29.12.2004 N 188-ФЗ (Собрание законодательства Российской Федерации, 2005, N 1, ст. 14; 2011, N 23, ст. 3263); постановление Правительства Российской Федерации от 03.04.2013 N 290 "О минимальном перечне услуг и работ, необходимых для обеспечения надлежащего содержания общего имущества в многоквартирном доме, и порядке их оказания и выполнения" (официальный интернет-портал правовой информации http://www.pravo.gov.ru, 12.04.2013; Собрание законодательства Российской Федерации, 2020, N 27, ст. 4236).".

22. В абзаце первом пункта 127 после слов "Здания многоквартирных жилых домов," слова "индивидуальных жилых домов," исключить.

23. В пункте 150 слово "неимеющих" заменить словами "не имеющих".

24. В пункте 157:

а) в абзаце втором слова "не имеющие контакт" заменить словами "не имевшие контакта";

б) в абзаце третьем после слов "инфицированные микроорганизмами 3 — 4 групп патогенности" дополнить словами "; отходы от деятельности в области использования возбудителей инфекционных заболеваний 3 — 4 группы патогенности, а также в области использования генно-инженерно-модифицированных организмов в медицинских целях, в том числе: отходы микробиологических, клинико-диагностических лабораторий; отходы, инфицированные и потенциально инфицированные микроорганизмами 3 — 4 групп патогенности; отходы сырья и продукции от деятельности по производству лекарственных средств и медицинских изделий, от производства и хранения биомедицинских клеточных продуктов; биологические отходы вивариев; живые вакцины, непригодные к использованию;";

в) абзац четвертый изложить в следующей редакции:

"отходы, инфицированные и потенциально инфицированные микроорганизмами 1 — 2 групп патогенности (чрезвычайно эпидемиологически опасные отходы, далее — класс В), в том числе: материалы и инструменты, предметы, загрязненные кровью и/или другими биологическими жидкостями; патологоанатомические отходы и органические операционные отходы (органы, ткани и секционный материал); пищевые отходы и материалы, контактировавшие с больными инфекционными болезнями, вызванными микроорганизмами 1 — 2 групп патогенности; отходы от деятельности в области использования возбудителей инфекционных заболеваний 1 — 2 группы патогенности, в том числе отходы микробиологических, клинико-диагностических лабораторий; инфицированные и потенциально инфицированные микроорганизмами 1 — 2 групп патогенности отходы сырья и продукции от деятельности по производству лекарственных средств и медицинских изделий;";

г) в абзаце пятом слова "отходы, не подлежащие последующему использованию" заменить словами "токсикологические опасные отходы, приближенные по составу к промышленным", после слов "в медицинских целях;" дополнить словами ", кроме инфицированных микроорганизмами классов 1-4;".

25. В пункте 181 после слов "емкости (контейнеры)," дополнить словами "исключающие возможность их самопроизвольного вскрытия,", слова "организации (медицинские пункты, кабинеты, фельдшерско-акушерские пункты) и других мест оказания медицинской помощи в медицинскую организацию для обеспечения их последующего обеззараживания, обезвреживания" заменить словами "и (или) филиалов (в том числе медицинских пунктов, кабинетов, фельдшерско-акушерских пунктов и других мест оказания медицинской помощи) внутри медицинской организации (одного юридического лица), имеющей в своем составе участок обеззараживания, обезвреживания медицинских отходов или в другую организацию, которая может обеспечить обеззараживание (дезинфекцию) и (или) обезвреживание физическими методами".

26. В пункте 183:

а) в абзаце первом слова "обязательному обеззараживанию (обезвреживанию), дезинфекции физическими методами" заменить словами "обязательным: дезинфекции физическими методами, обеззараживанию и обезвреживанию";

б) в абзаце третьем слова "обеззараживания (обезвреживания)" заменить словами "обеззараживания, обезвреживания".

27. В подпункте "д" пункта 201 предложение третье исключить, после слова "ограждение" дополнить словами "и навес".

28. Пункт 208 изложить в редакции: "п. 208 Для учета медицинских отходов классов Б, В, Г и Д в медицинских организациях ведутся следующие журналы (рекомендуемые образцы приведены в приложении N 8 к Санитарным правилам):

технологический журнал учета отходов в структурном подразделении в соответствии с классом отхода;

технологический журнал учета медицинских отходов медицинской организации;

технологический журнал участка по обращению с отходами."

29. В подпункте "з" пункта 211 слово "оборащению" заменить словом "обращению".

30. В пункте 217 слово "храненение" заменить словом "хранение".

31. В пункт 230 после слова "отходов" дополнить словами "I и II класса опасности".

32. В подпункте 3 пункта 273 слово "соответствущих" заменить словом "соответствующих работ", слово "аппартура" заменить словом "аппаратура".

33. В пункте 278:

а) в первом абзаце слово "более" заменить словом "менее";

б) дополнить абзацем третьим следующего содержания:

"Обработка железнодорожных путей прекращается за 300 м до мостов и санитарных зон границ станций (платформ), водоемов.".

34. В пункте 279:

а) абзац второй изложить в следующей редакции:

"Сокращение указанных санитарных разрывов до 50 метров допускается в личных подсобных хозяйствах при использовании ранцевых опрыскивателей, в горных и предгорных зонах при обработках многолетних плодовых культур (сады, виноградники) при условии использования в непосредственной близости от жилых домов и мест отдыха населения (в пределах прилегающей к ним 300-метровой зоны) только ранцевых опрыскивателей и препаратов, зарегистрированных в установленном порядке и указанных в Государственном каталоге пестицидов и агрохимикатов, разрешенных к применению на территории Российской Федерации, под литерой "Л" (для применения в условиях личных подсобных хозяйств). Остальная территория садов и виноградников может обрабатываться в соответствии с утвержденными регламентами и особенностями применения, приведенными в рекомендациях о транспортировке, применении и хранении.";

б) дополнить сноской 51 следующего содержания:

" Федеральный закон от 19.07.1997 N 109-ФЗ "О безопасном обращении с пестицидами и агрохимикатами" (Собрание законодательства Российской Федерации, 21.07.1997, N 29, ст. 3510; 2021, N 27, ст. 5049).";

в) дополнить сноской 52 следующего содержания:

" Приказ Минсельхоза России от 21.01.2022 N 23 "Об установлении требований к форме и порядку утверждения рекомендаций о транспортировке, применении, хранении пестицидов и агрохимикатов, об их обезвреживании, утилизации, уничтожении, захоронении, а также к тарной этикетке" (зарегистрировано Минюстом России 22.02.2022, регистрационный N 67417).".

35. Пункт 288 дополнить вторым — пятым абзацами следующего содержания:

"При наличии на складе пестицидов и агрохимикатов с превышенным гарантийным сроком хранения, в таре с нарушенной целостностью или препаратов с видимыми признаками изменения внешнего вида отпуск последних осуществляется только после анализа на соответствие пестицида (агрохимиката) основным физико-химическим показателем (массовая доля действующего вещества, стабильность водной эмульсии, стабильность водной суспензии, массовая доля воды, дисперсность, кислотность, стойкость при охлаждении).

Полимерные канистры из-под пестицидов должны быть промыты непосредственно в процессе обработки растений, сразу же после того, как пестицид был использован для приготовления рабочего раствора.

Промытые полимерные канистры подлежат возврату поставщикам пестицидов в открытом виде и с проделанными в них отверстиями (во избежание повторного использования канистр не по назначению) либо направляются на переработку (переплавку) в качестве вторичного сырья.

Промытая металлическая тара используется на производствах в качестве оборотной тары либо отправляется с проделанными в ней отверстиями на переплавку в качестве вторичного сырья.".

36. В пункте 298 слово "осуществлящими" заменить словом "осуществляющими".

37. В приложениях 1-9 слова "к СП 2.1.3684-21" заменить словами "к СанПиН 2.1.3684-21".

38. В приложении 9 в столбце "Наименование показателя" таблицы "Основные показатели оценки санитарного состояния почв территорий населенных мест в зависимости от их функционального назначения":

а) в строке 19 слова "Лактозоположительные кишечные палочки (колиформы), индекс" заменить словами "Общие колиформные бактерии (ОКБ), в том числе E. coli, КОЕ/г";

б) в строке 20 слово "стрептококки" исключить, слово "индекс" заменить словом "КОЕ/г";

в) в строке 21 слова "Патогенные микроорганизмы (по эпидпоказаниям), индекс" заменить словами "Патогенные бактерии в т.ч. сальманеллы (по эпидпоказаниям), КОЕ/г";

г) в строке 22 слова "в 1 кг" заменить словами "в экз/ 1 кг";

д) в строке 23 слова "Цисты кишечных патогенных простейших, экземпляров в 100 г" заменить словами "Цисты (ооцисты) кишечных патогенных простейших, экз/ 100 г";

е) в строке 24 слова "в почве площади" заменить словами "в пробе".

39. Пункт 5 Приложения N 4 изложить в следующей редакции: "Отбор проб воды распределительной сети проводится на границе эксплуатационной ответственности организаций, осуществляющих водоснабжение, на повысительных насосных станциях, на водомерных узлах многоквартирных домов, из пожарных гидрантов, водоразборных колонках, в случае многоквартирных домов место отбора проб организуется на домовом вводе и в распределительной внутридомовой сети."

Регулируются вопросы отключения горячей воды в период ежегодных профилактических ремонтов.

Исключается норма о ежедневной влажной уборке помещений общего пользования многоквартирного дома. Устанавливается, что кратность уборки устанавливается в соответствии с жилищным законодательством.

Реактивы и растворы

. Вода дистиллированная;

. Вода деионизованная;

. ЭДТА (этилендиаминтетрауксусная кислота) ГОСТ10652-73;

. Натрия гидроокись ГОСТ4328-77;

. Гуанидинтиоцианат “Serva” Германия;

. Соляная кислота ХЧ ГОСТ 3118-67;

. Спирт этиловый ГОСТ 183000-87 (ректификат);

. Мертиолят натрия;

Оборудование

. Дистиллятор А1013 — производительность 7,6 л/ч (Barustead,США);

. Термостат ЕВ- объем от 18 до 1000 л с регулируемым диапазоном температур от 50 до 800 С, (Jouan, Франция);

. Встряхиватель V-4 типа вортекс- регулируемый, (Elmi, Латвия);

. Микроцентрифуга для пробирок типа Eppendorf -СМ-50 -12х1,5 (0,5) мл ,до 12000 об/мин, ротор — угловой, (Elmi, Латвия);

. Баня водяная J-12 (18,30) с корпусом из нержавеющей стали с термометром, на 12,18,30л, вместимостью соответственно 72,108 и 192 пробирки диаметром 16 мм; максимальная температура 1000 С, (Jouan, Франция).

АННОТАЦИЯ

В настоящих указаниях предложены способы обеззараживания материала зараженного или подозрительного на зараженность бактериями I-IV групп патогенности при проведении генодиагностических исследований методом ПЦР.

Указания предназначены для специалистов санитарно-гигиенических, лечебно-профилактических учреждений, генодиагностических центров и лабораторий, применяющих метод ПЦР для обнаружения ДНК возбудителей инфекционных заболеваний.

РАЗРАБОТАНО: Российским научно-исследовательским противочумным институтом "Микроб" г.Саратов.

СОСТАВИТЕЛИ: Куличенко А.Н., Касьян И.А., Гаранина С.Б., Майоров Н.В.,Тучков И.В.,Еремин С.А., Дроздов И.Г., Кутырев В.В.

Формула метода

Рекомендуемые средства стерилизации материала при ПЦР-анализе имеют следующие механизмы антимикробного действия. Мертиолят натрия необратимо связывается с SH-, NH2- и COOH-группами белковых молекул с дальнейшим ингибированием дыхательной цепи микроорганизма.

Инактивирующий эффект лизирующего буфера обусловлен действием хаотропного агента — гуанидинтиоцианатом, обеспечивающим разрушение клеточных мембран и лизис клеток с последующим выходом ДНК.

Метод обеззараживания содержащих споры микроорганизмов основан на прорастании споры в вегетативные клетки при культивировании в благоприятных для герминации условиях. Далее под воздействием температуры (для сибиреязвенного микроба еще и пенициллина) происходит разрушение клеточной мембраны и выход ДНК.

Оглавление

Вспомогательные изделия и материалы

Реактивы и растворы

Способы обеззараживания материала, исследуемого методом ПЦР

Вспомогательные изделия и материалы

. Вата медицинская ГОСТ 5556-81;

. Микроцетрифужные пробирки-виалы типа Eppendorf 0,5-1,5 мл;

. Колбы мерные ГОСТ 12738-77 50, 100, 200 мл;

. Лабораторный штатив ТУ 64-17-07-72;

. Микродозаторы «Ленпипет» Россия, 1-20,20-200,200-1000 мкл;

. Наконечники для микродозаторов «Ленпипет», Россия;

. Пробирки ГОСТ 10-515-75;

. Пипетки мерные ГОСТ 20292-74;

. Цилиндры мерные ГОСТ 1770-74 1-25, 1-100, 1-1000мл.

Средства измерения

. Весы PG 203 — прецизионные одночашечковые электронные цифровые с функцией обнуления тары и другими вспомогательными функциями, стандартного уровня, максимальная загрузка — 210 г, погрешность при измерении-0,001 г, (Mettler, Швейцария);

. Иономер рН-150 (рН-метр-милливольтметр); используется для определения рН буферных растворов диапазон рН от -1 до 14, точность 0,01 рН, температура анализируемой среды от -10° до 100°С ( Белоруссия).

Материально-техническое обеспечение*

* указанные средства измерения и оборудование может быть заменено на аналогичную по характеристикам продукцию других фирм.

Правила подготовки к исследованию «Выявление условно-патогенных микроорганизмов методом ПЦР»

Взятие материала желательно проводить до диагностических и лечебных манипуляций в предполагаемом месте локализации возбудителя.

Взятие биологического материала рекомендуется проводить до начала применения лекарственных препаратов (антибактериальных, противовирусных, противопаразитарных). При проведении исследований в целях контроля лечения целесообразно проводить взятие проб на ПЦР-тесты не ранее, чем через 10-14 дней после окончания применения соответствующих препаратов локального действия и не ранее, чем через один месяц после проведения системной терапии.

При подготовке пациента к процедуре следует учесть:

При соскобе эпителиальных клеток ротоглотки:

  • за 6 часов до исследования не рекомендуется использовать лекарственные средства для орошения ротоглотки и препараты для рассасывания;

  • перед проведением исследования не чистить зубы, не использовать жевательную резинку/пастилки для освежения дыхания;

  • перед началом исследования прополоскать полость рта водой комнатной температуры.

При соскобе эпителиальных клеток урогенитального тракта

Обследование женщин целесообразно проводить в первую половину менструального цикла, не ранее 5-го дня. Допустимо обследование во второй половине цикла, не позднее, чем за 5 дней до предполагаемого начала менструации. При наличии выраженных симптомов воспаления, взятие материала проводится в день обращения. Накануне и в день обследования пациентке не рекомендуется выполнять спринцевание влагалища. Не рекомендуется взятие биоматериала на фоне проведения антибактериальной терапии (общей/местной) и во время месячных, ранее 24-48 часов после полового контакта, интравагинального УЗИ и кольпоскопии.

И для мужчин, и для женщин, рекомендуется брать материал не ранее, чем через 14 дней после применения антибактериальных препаратов и местных антисептиков, и не ранее, чем через один месяц после применения антибиотиков перорально. Если для исследования берут соскоб из уретры, сбор материала проводят до или не ранее 2-3 часов после мочеиспускания.

При исследовании мочи

Следует собирать первую утреннюю порцию мочи в количестве 20-30 мл в стерильный флакон. Не рекомендуется взятие биоматериала на фоне проведения антибактериальной терапии.

Желательно соблюдать все описанные условия, если лечащим врачом не рекомендовано иное.

СПОСОБЫ ОБЕЗЗАРАЖИВАНИЯ МАТЕРИАЛА, ИССЛЕДУЕМОГО МЕТОДОМ ПЦР

Вся работа с исследуемым материалом, подозрительным на зараженность микроорганизмами I-II групп патогенности проводится в соответствии с СП 1.2.011.-94 “Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности.” М.1994 г.

Отобранные для исследования пробы могут быть инактивированы следующими способами:

1.Материал (кровь, биологические жидкости, экстракты органов, смывы с поверхностей, фильтраты почвы), подозрительный на зараженность не содержащими споры микроорганизмами I-II групп патогенности

1.1. бработка мертиолятом натрия с прогреванием при температуре 56°С: к исследуемым образцам добавляют мертиолят натрия, проверенный на бактерицидное действие , до концентрации 1:10000 с последующим прогреванием их при 56°С в течение 30 минут.

1.2. Обработка лизирующим буфером с гуанидинтиоцианатом и прогреванием при температуре 65°С: к 100 мкл обработанных мертиолятом натрия образцов (п.1.1.), разлитым в микроцентрифужные пробирки типа Эппендорф добавляют 300 мкл лизирующего буфера и инкубируют 15 минут при температуре 65°С. После выполнения данного этапа материал считается обеззараженным. Далее для выделения ДНК используют метод нуклеосорбции на силикагеле, начиная с этапа добавления сорбента. ПЦР выполняют по общепринятой методике в соответствии с указаниями к ПЦР наборам изготовителя.

1.3. Приготовление лизирующего буфера с гуанидинтиоцианатом

Гуанидинтиоцианат ( конечная концентрация 6М ) — 18 г, дитиотрейтол (0,2М ) — 95 мг и ЭДТА (0,5М ) – 1мг — растворяют в 30 мл дистиллированной воды. Готовый раствор, провереннный на бактерицидное действие, хранится в темной посуде в холодильнике до 6 месяцев.

2. Материал, подозрительный на зараженность не содержащими споры микроорганизмами III-IV групп патогенности

2.1. Прогревание при 100°С в течение 30 минут.

2.2. Обработка лизирующим буфером с гуанидинтиоциа натом и прогреванием при 65°С в течение 15 минут, как описано в п. 1.2.

Исследуемые образцы в количестве 100 мкл помещают в микроцентрифужные пробирки типа Эппендорф, смешивают с 300 мкл лизирующего буфера с гуанидинтиоцианатом и прогревают при 65°С в течение 15 минут.

После лизиса гуанидинтиоцианатом для выделения ДНК используют метод нуклеосорбции на силикагеле, начиная с этапа добавления сорбента.

ПЦР выполняют по общепринятой методике в соответствии с указаниями к ПЦР наборам изготовителя.

3. Материал, подозрительный на зараженность содержащими споры микроорганизмами II-IV группы патогенности

3.1. Герминация спор с обработкой пенициллином и прогреванием при 100°С в течение 10 минут.

Исследуемый материал в количестве 0,1 мл засевают в пробирки с 0,9 мл бульона Хоттингера рН 7,6 и инкубируют с аэрацией при температуре 37°С в течение 2,5 часов. Добавляют пенициллин (1000ед/мл) и инкубируют при 37°С – 15 минут. Затем прогревают на водяной бане при температуре 100°С в течение 10 минут.

3.2. Обработка лизирующим буфером с гуанидинтиоцианатом и прогреванием при температуре 65°С : к 100 мкл обработанных как описано в п. 2.1. образцов, разлитым в микроцентрифужные пробирки типа Эппендорф добавляют 300 мкл лизирующего буфера и инкубируют 15 минут при температуре 65°С. После выполнения данного этапа материал считается обеззараженным. Далее для выделения ДНК используют метод нуклеосорбции на силикагеле, начиная с этапа добавления сорбента. ПЦР выполняют по общепринятой методике в соответствии с указаниями к ПЦР наборам изготовителя.

Послеинактивации проб любым из вышеописанных способов дальнейшие исследования проводятся как с обеззараженным материалом.

НОРМАТИВНЫЕ ССЫЛКИ

Санитарные Правила 1.2.011-94 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности» М. 1994г.

Санитарные Правила 1.2.731-99 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтами» М. 1999г.

Инструкция по контролю специфической стерильности экспериментальных препаратов, приготовленных из культур чумного или холерного микробов. Саратов 1982 г.

Временная фармакопейная статья (ВФС) 42-62-ВС-86 для диагностикума бруцеллезного жидкого для реакции агглютинации .

Методические указания "Современные методы микробиологической диагностики туберкулеза." М. 1975 г.

Руководство по профилактике чумы. Саратов 1992 г.

Оцените статью
Минтруд России